AUTORES: V. Blanc¹, S. Isabal¹, M.C. Sánchez²,A. Llama-Palacios², D. Herrera², R. León¹ 

1. Departamento de Microbiología, DENTAID S. L., Cerdanyola del Vallès, España

2. Grupo de investigación ETEP, Universidad Complutense de Madrid, Madrid, España

Antecedentes y objetivos

Las bacterias de la cavidad oral crecen en forma de biofilm. Estas estructuras están sujetas a condiciones constantes de flujo de fluidos salivales y de fluidos gingivales creviculares. Los objetivos de este estudio fueron: (i) desarrollar y caracterizar un modelo in vitro de biofilm con bacterias orales que crecen bajo condiciones de flujo y de cizallamiento; y (ii) demostrar la utilidad del modelo para evaluar la actividad de tres agentes antiplaca.

Materiales y métodos

Se utilizó un biorreactor para cultivar las bacterias orales Streptococcus oralis, Actinomyces naeslundii, Veillonella parvula, Fusobacterium nucleatum, Aggregatibacter  actinomycetemcomitans y Porphyromonas gingivalis bajo condiciones planctónicas. Los biofilms se establecieron usando un dispositivo Robbins modificado en discos de hidroxiapatita (HAP). Los biofilms de 3 a 7 días de edad fueron analizados utilizando métodos de cultivo, microscopia electrónica de barrido, tinción Vivas/ Muertas e hibridización fluorescente in situ (microscopía de escaneo láser confocal). Finalmente, evaluamos la actividad antimicrobiana de tres enjuagues bucales [0,12% de clorhexidina (CHX), 0,12% de clorhexidina con fluoruro sódico (CHX+NaF) y 0,12% de clorhexidina con cloruro de cetilpiridinio (CHX+CPC)] utilizando un test planctónico (estudios de mortalidad en cortos intervalos de tiempo) y en el modelo de biofilms de 4 días.

Resultados

Los recuentos de células viables mostraron a lo largo del estudio que cada una de las especies fue encontrada consistentemente en los biofilms. La arquitectura y la distribución celular fueron similares a las descritas en biofilms in situ, con la excepción de una delgada capa de células vivas encontrada sobre la superficie de la HAP. Los test de eficacia de los colutorios demostraron que las células en biofilm fueron más tolerantes en comparación con las células planctónicas. Además, se observó que en biofilms formados in vitro durante 4 días, CHX+CPC causó una mortalidad significativamente mayor en comparación con CHX (p = 0,003) y  HX+NaF (p < 0,001).

Conclusión

Los resultados sugieren que disponemos de un sistema altamente reproducible para la  formación de biofilm oral multiespecie y que es una herramienta útil para evaluar las moléculas antibacterianas antes de su evaluación clínica. También tiene un gran potencial para ser utilizado en la investigación básica sobre biofilms supragingivales y subgingivales.